反相高效液相色谱（RP-HPLC）分析多肽与蛋白

采用反相模式的高效液相色谱（RP-HPLC）是生物分子分析与纯化的首选技术。其之所以成为蛋白、多肽分析纯化领域最主流方法，核心优势在于优异的分离度。

反相高效液相色谱可分离序列高度相近的多肽，无论小分子多肽还是大分子蛋白均适用。即便仅相差单个氨基酸残基的多肽链，也常能实现有效分离。制备型反相液相色谱常被用于毫克至克级规模多肽的纯化制备。

多肽与蛋白分离专用反相液相色谱柱

反相高效液相色谱填料是通过将碳氢链键合在硅胶基质上制备而成。构成填料的碳氢基团为直链脂肪烃，分为十八碳（C18）、八碳（C8）、四碳（C4）三种，填料的疏水性由碳链长度决定。

下文给出相关选型参考，可判断分离多肽、蛋白时最优填料类型：

C18 色谱柱：推荐用于分子量＜5000 道尔顿的多肽及小分子蛋白；

分子量 5000–10000 道尔顿的蛋白与中等长度多肽：根据分子疏水性选择 C8 或 C18 柱；

分子量＞10000 道尔顿且疏水性强的大分子：优先选用 C4 柱；但 C8、C18 有时具备差异化选择性，也可实现目标物分离。

VYdamas® C8-P、VYdamas® C18 两款色谱柱更适合极性、中等极性多肽样品。

本系列超高纯度球形硅胶提供三种不同孔径规格，可根据目标分子尺寸匹配最优分离性能：

100 埃（Å）孔径：适配分子量 5000 道尔顿以内小分子多肽的分析与纯化；

200 埃（Å）孔径：最适合分子量 5000–10000 道尔顿的中长多肽；

300 埃（Å）孔径：专为分子量大于 10000 道尔顿、最高至 10 万道尔顿的多肽及蛋白分析纯化设计。

粒径选型由应用场景决定：

分析级色谱（内径最高 4.6 毫米）：选用 3–5 微米填料；

实验室制备级色谱（内径最高 21.2 毫米）：优先 5–10 微米填料；

工业化工艺规模纯化：需选用更大粒径填料（15 微米及以上）。

Vydamas C4

超高纯度球形硅胶

100 埃、200 埃孔径：多肽分析与纯化专用

300 埃孔径：蛋白质分析与纯化专用

3 μm、5 μm 粒径：适用于分析级色谱

5 μm、10 μm、15 μm 粒径：适用于制备级色谱

20 μm、45 μm 粒径：适用于快速色谱纯化